现有的检测脑样品中甲醛(FA)的方法价格昂贵，需要复杂的实验程序。在这里,我们建立了一个高度敏感的和有选择性的分光光度法,基于FA与无色反应试剂的反应4-amino-3-penten-2-one (Fluoral-P)生成黄色化合物,3,5-diacetyl-1, 4-dihydrolutidine (DDL),可在室温下的分光光度计检测到420海里。反应的敏感反应时间点为第一个小时，导数反应的最佳pH值为6.0。检测极限(LOD)和量化的限制(定量限)检测FAμMμM 0.5和2.5,分别。用这种方法，在注射了FA的小鼠的大脑和阿尔茨海默症患者的解剖海马组织中都检测到了异常高水平的FA。这一发现表明，改进的荧光- p法是有效的测量大脑中FA水平。
1. 介绍
甲醛(FA)是一种工业化工产品，广泛用于建筑材料和家居产品的生产，在室内环境中有多种来源释放，如刨花板、家居产品、[1]胶合板等;因此，大量的工人和居民不可避免地接触到FA[2]。初步研究表明，气态FA可导致致癌和胎儿异常[3]，临床和流行病学调查发现，与工作相关的FA暴露可导致头痛、焦虑、疲劳、睡眠障碍，尤其是认知障碍[4,5]。此外，动物实验结果一致显示，暴露于气态FA会导致异常行为，包括空间记忆缺失[6-8]。
有趣的是，在暴露于外源性FA[9]的人类中，以及在老年小鼠和大鼠中，在患有认知障碍[11]的健康老年人中，以及在患有阿尔茨海默病(AD)[12]的患者中，都检测到了内源性FA的异常水平。文献证据表明，在动物模型中直接在脑室内注射过量的FA会导致中枢神经系统的损伤，特别是显著的记忆损伤[13-16]。这些数据有力地支持了海马体中FA过多会导致认知缺陷的观点。
鉴于FA的神经毒性作用，已经开发了多种分析方法来检测动物组织中的FA。最早测定脑组织中FA (~ 0.16-0.24 mM)的方法是采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)[17]法。另一种灵敏的检测肝脏中FA的方法是利用高效液相色谱法和紫外检测器(HPLC-UV)[18,19]。最近，使用高效液相色谱荧光检测器(HPLC-Fluo)，我们发现正常成年小鼠和大鼠的海马区存在0.25-0.32 mM FA。虽然现有的方法为脑内FA的检测提供了一些准确、超灵敏的检测方法，但由于费用昂贵、实验步骤复杂、分析试剂有毒等缺点，限制了其实际应用。因此，需要一种简单、灵敏、高效的测定生物样品中微量FA的方法。
在此,我们报告一个高度敏感的和有选择性的分光光度法检测FA小鼠的大脑中已经建立了在室温下用无色试剂——4-amino-3-penten-2-one (Fluoral-P)有选择地与足总反应生成有色化合物,3,5-diacetyl-1, 4-dihydrolutidine (DDL)。因此，改进的荧光- p法适用于脑FA的检测和FA神经毒性的评估。
2. 材料和方法
2.1。试剂和化学FA溶液
37% (w / v);(美国，圣路易斯);4-氨基-3-戊-2- 1(氟-p, CAS: 1118-66-7)。http://TCIchemicals.com、日本);盐酸(HCl, 1n, Sigma-Aldrich, Saint Louis, USA);氢氧化钠(NaOH, 2n, Sigma-Aldrich);二甲基亚砜(DMSO, Sigma-Aldrich，美国圣路易斯);三氯乙酸(TCA, Sigma-Aldrich, Saint Louis, USA);去离子水(毫q水);磷酸盐缓冲盐水(PBS, 1 mM，北京化工大学);采用生理盐水(NS，北京化工大学，中国)进行研究。
2.2。设备
冰箱(海尔集团，北京，中国);pH计(上海仪器电气科学仪器股份有限公司pH - 3c);可调高速均质器(常州良优实验仪器厂FSH-2A);型号ZD2011584，来自加拿大安大略省Nepean的Millipore公司;SP-Max 2300A多光谱微板分光光度计(上海生物科技有限公司闪光光谱，上海);莫里斯水迷宫(上海生物威尔有限公司
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